2×Multiplex Probe QPCR Master Mix Dengan UDG（Tiada ROX）

 

Nama Produk	Kucing.No.	Spesifikasi
2×Multiplex Probe qPCR Master Mix dengan UDG (Tiada ROX)	G3347-01	1 mL
	G3347-05	5×1 mL
	G3347-15	15×1 mL

 

 

Produk ini ialah pracampuran PCR kuantitatif 2×pendarfluor (Tiada ROX) berdasarkan kaedah kuar, ia mengandungi polimerase TaqDNA permulaan panas, dNTP dan komponen penimbal yang diperlukan, dan secara serentak boleh melakukan sehingga empat kali ganda tindak balas PCR kuantitatif pendarfluor dalam tiub tindak balas yang sama. Premix tidak mengandungi pewarna pembetulan dan sesuai untuk peralatan tanpa pembetulan ROX. Penambahan pewarna biru bukan pendarfluor pada produk ini boleh mengelakkan ralat pensampelan. Selain itu, produk ini juga termasuk Uracil-DNAGlycosylase (UDG) dan jumlah tambahan dUTP yang dioptimumkan khas, yang boleh menghalang pencemaran sisa templat dan meningkatkan kekhususan, sensitiviti dan ketepatan produk.

 

 

Hantar dengan ais basah dan simpan pada -20 darjah ; sah selama 12 bulan.

 

 

Nombor Komponen	Komponen	G3347-01	G3347-05	G3347-15
G3347-01	2×Multiplex Probe qPCR Master Mix dengan UDG (Tiada ROX)	1 mL	5×1 mL	15×1 mL
Manual		Satu salinan

 

 

1. Instrumen PCR kuantitatif pendarfluor masa nyata diperlukan.

2. Tiub tindak balas qPCR khas atau plat tindak balas untuk eksperimen diperlukan.

3. Primer dan probe QPCR (primer rujukan dan prinsip reka bentuk probe) diperlukan.

 

 

1. Syorkan sistem tindak balas PCR:

Komponen	20 μL rxn	Kepekatan Akhir
2×Multiplex Probe qPCR Master Mix dengan UDG (Tiada ROX)	10 μL	1×
Primer Hadapan (10 μM)a	Pembolehubah	0.1~0.5 μM
Primer Songsang (10 μM)a	Pembolehubah	0.1~0.5 μM
Probe (10 μM)a	Pembolehubah	0.1~0.5 μM
Templatb	Pembolehubah	mengikut keperluan
Air Tanpa Nukleus	Tambah kepada 20 μL

 

a. Biasanya, kesan penguatan yang baik boleh diperolehi dengan kepekatan akhir {{0}}.2 μM. Apabila prestasi tindak balas adalah lemah, kepekatan primer boleh dilaraskan dalam julat 0.1~0.5 μM.

b. Jumlah penambahan templat berbeza mengikut bilangan salinan gen sasaran dalam penyelesaian templat. Kecerunan mencairkan templat dan menyiasat jumlah penambahan templat yang sesuai. Dalam sistem tindak balas 20 μL, jumlah DNA templat hendaklah kurang daripada 100 ng. Apabila menggunakan cDNA (larutan tindak balas RT) tindak balas RT-PCR sebagai templat, jumlah penambahan tidak boleh melebihi 10% daripada jumlah keseluruhan larutan tindak balas PCR.

 

2. Prosedur tindak balas PCR (boleh dilaraskan mengikut model):

A. Kaedah dua langkah					B. Kaedah tiga langkah
pentas	Langkah	Kitaran	Temp	Masa	pentas	Langkah	Kitaran	Temp	Masa
Peringkat 1	UDG pengeraman	1	50 darjah	2 min	Peringkat 1	UDG pengeraman	1	50 darjah	2 min
Peringkat 2	pra- denaturasi	1	95 darjah	30 saat	Peringkat 2	pra- denaturasi	1	95 darjah	30 saat
Peringkat 3	Denaturasi	40	95 darjah	15 saat	Peringkat 3	Denaturasi	40	95 darjah	15 saat
	Penyepuhlindapan /Sambungan		60 darjah	30 saat		Penyepuhlindapan		55-65 darjah	10 saat
						Sambungan		72 darjah	30 saat

a. Untuk meningkatkan kekhususan amplifikasi, prosedur dua langkah boleh digunakan atau suhu penyepuhlindapan boleh ditingkatkan. Untuk meningkatkan kecekapan amplifikasi, prosedur tiga langkah boleh digunakan atau masa lanjutan boleh dilanjutkan.

 

 

1. Selepas pencairan, sila campurkan perlahan-lahan ke atas dan ke bawah, jangan pusaran, elakkan buih, gaul rata sebelum digunakan.

2. Semasa menyediakan penyelesaian tindak balas, sila letakkan reagen di atas ais.

3. Produk mengandungi pewarna pendarfluor, jadi cahaya yang kuat harus dielakkan semasa menyediakan penyelesaian tindak balas qPCR.

4. Petua pakai buang baharu hendaklah digunakan untuk penyediaan campuran tindak balas untuk mengelakkan pencemaran silang.

5. Elakkan kitaran beku-pencairan Master Mix, dan cuba gunakannya dalam masa sebulan selepas pencairan.

 

 

ABI: PikoRealTM Cycler;

Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;

Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;

IIIumina: Eco QPCR;

Cepheid: SmartCycler®;

Qiagen Corbett: siri Rotor-Gene®;

Roche: siri LightCycler™;

Takara: Siri Dadu Thermal Cycler;

Analitikjena: siri qTOWER;

Hangzhou Bori: siri LineGene;

 

 

Prinsip reka bentuk primer Taqman

1. Tentukan probe sebelum mereka bentuk primer.

2. Apabila mereka bentuk primer, dekati dengan probe yang mungkin tanpa bertindih dengan probe.

3. Elakkan menggunakan 4 atau lebih G berturut-turut.

4. Nilai Tm setiap buku asas hendaklah 58~60 darjah .

5. 5 nukleotida terakhir di hujung primer tidak boleh mempunyai lebih daripada 2 G dan C.

6. Primer lebih baik tidak mengandungi urutan pelengkap diri, jika tidak, ia akan membentuk penyepit rambut.

7. Untuk mengelakkan penguatan genom, adalah lebih baik untuk mereka bentuk primer merentas ekson.

8. Panjang produk amplifikasi hendaklah 50~150 bp untuk mendapatkan kecekapan PCR yang terbaik.

9. Tiada produk bukan khusus lain ditemui dalam keputusan perbandingan pada NCBI.

 

 

1. Panjang probe hendaklah 13~25 bp (13~30 bp jika probe TaqMan konvensional digunakan).

2. Nilai Tm hendaklah 65 darjah ~70 darjah , yang biasanya 5 darjah ~10 darjah lebih tinggi daripada nilai TM primer untuk memastikan kuar secara keutamaan mengikat gen sasaran semasa penyepuhlindapan.

3. Untuk buku asas, kandungan guanin-sitosin (G+C) hendaklah antara 40% dan 70%.

4. 5 'hujung probe harus mengelak daripada menggunakan G, kerana 5' hujung G akan mempunyai kesan pelindapkejutan, walaupun ia dipotong.

5. Dalam keseluruhan siasatan, kandungan C jelas lebih tinggi daripada G, dan kandungan G yang tinggi akan mempunyai kesan pelindapkejutan, jadi kita boleh memilih rantai berpasangan lain sebagai siasatan.

Prinsip reka bentuk kuar Taqman MGB

1. Pewarna laporan (contohnya, FAMTM) dilampirkan pada hujung 5 ' kuar.

2. Terdapat kumpulan pelindapkejutan bukan pendarfluor (NFQ) pada hujung 3 'probe.

3. Bahagian MGB dilekatkan pada NFQ, dan MGB meningkatkan suhu penyepuhlindapan (Tm) tanpa meningkatkan panjang probe, jadi kuar yang lebih pendek boleh direka bentuk, tetapi tidak kurang daripada 13 bp.

4. Pada dasarnya, selagi terdapat mutasi asas dalam probe MGB, MGB boleh mengesannya (probe MGB tidak akan mengikat gen sasaran dan tidak akan menghasilkan isyarat pendarfluor).

 

Untuk Kegunaan Kajian Sahaja!

 

 

Cool tags: 2×multiplex probe qpcr master mix dengan udg（none rox）, China 2×multiplex probe qpcr master mix dengan udg（none rox） pengeluar, pembekal, kilang