T7 Kit Transkripsi Hasil Tinggi

 

Nama Produk	Kucing.No.	Spesifikasi
T7 Kit Transkripsi Hasil Tinggi	G3021-50T	50 T

 

 

Kit Transkripsi Hasil Tinggi T7 ialah sistem lengkap untuk sintesis RNA yang cekap untuk probe hibridisasi blot in situ, ujian perlindungan ribonuclease, pengubahsuaian selepas transkrip termasuk penyambungan RNA dan poliadenilasi, dan untuk terjemahan in vitro. Polimerase RNA T7 sangat spesifik untuk penganjurnya sendiri dan akan menyalin sejumlah besar RNA daripada jujukan DNA (contohnya, plasmid, serpihan tindak balas rantai polimerase (PCR) atau DNA Sintetik) di hilir penganjurnya,

Dalam sistem tindak balas, 1 ug input templat boleh menghasilkan lebih daripada 100 ug RNA, yang sesuai untuk penyediaan pelbagai panjang RNA.

 

 

 

Kapal dengan ais basah; Simpan pada -20 darjah , sah selama 12 bulan.

 

 

Nombor Komponen	Komponen	G3021-50T
G3021-1	Campuran Enzim Transkripsi RNA T7	200 μL
G3021-2	Penampan Reaksi Transkripsi 5×T7	250 μL
G3021-3	Campuran NTP 25 mM	100 μL
G3021-4	DNase I	50 μL
G3021-5	Air Tanpa Nuklease	1 mL
G3021-6	Templat Kawalan (0.5 ug/μL)	10 μL
Manual		Satu salinan

 

 

1. Persediaan untuk templat:

a. Plasmid yang mengandungi promoter T7 : untuk mendapatkan RNA dengan panjang tertentu, plasmid harus dilinearkan sepenuhnya dan disucikan sebagai templat. Penjajaran plasmid dengan enzim sekatan harus menghasilkan 5' terjual atau hujung tumpul (elakkan 3' hujung yang menonjol). Jumlah templat yang disyorkan setiap tindak balas ialah ~1 ug;

b. Produk PCR atau DNA sintetik: 5 'hujung primer bagi helai bukan pengekodan yang digabungkan dengan jujukan daripada promoter T7 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') melakukan penguatan PCR.. Produk PCR boleh digunakan secara langsung sebagai templat transkripsi tanpa penulenan, tetapi hasil RNA akan meningkat selepas penulenan. Jumlah templat yang disyorkan setiap tindak balas ialah ~0.5 ug.

2. Tindak balas terjemahan in vitro :

a. Tambahkan komponen berikut ke dalam tiub steril tanpa nuklease di atas ais mengikut susunan yang ditunjukkan

b. Gaul perlahan-lahan dan sentrifuge sebentar.

c. Inkubasi pada suhu 37 darjah selama 2 jam. (Laraskan masa tindak balas bergantung pada panjang sasaran dan hasil RNA yang diingini. Contohnya, RNA kurang daripada 300 nt, disyorkan untuk mengeram selama 4 jam atau lebih lama).

Komponen	Jumlah	konk.
templat	0.5-1 ug	25-50 µg/mL
Penampan Reaksi Transkripsi 5×T7	4 μL	1×
Campuran NTP 25 mM	2 μL	2.5 mM
Campuran Enzim Transkripsi RNA T7	4 μL
Air Tanpa Nuklease	Sehingga 20 μL	--

3. Rawatan DNase I

Selepas tindak balas, tambah 1 μL DNase I, gaul sebentar dan eramkan pada suhu 37 darjah selama 15 minit.

4. Kuantifikasi produk transkripsi

a. Analisis elektroforesis gel

1% denaturasi gel agarosa formaldehid adalah disyorkan.

b. Kaedah penyerapan UV

Kepekatan produk RNA ditentukan oleh peralatan penyerapan UV selepas purificaton (nukleotida bebas akan menjejaskan ketepatan kuantifikasi).

 

 

1. Sila pakai sarung tangan dan topeng yang sesuai dan gunakan bahan guna pakai bebas RNase untuk mengelakkan pencemaran RNase.

2. Untuk menyediakan RNA berlabel, sila gantikan Campuran NTP dalam kit dengan reagen yang sesuai.

3. Panjang transkripsi templat kawalan dalam kit ialah 500 nt.

4. Untuk keselamatan dan kesihatan anda, sila pakai cermin mata keselamatan, sarung tangan atau pakaian pelindung.

 

Untuk Kegunaan Kajian Sahaja!

 

 

Cool tags: kit transkripsi hasil tinggi t7, kit transkripsi hasil tinggi t7 China pengeluar, pembekal, kilang