SweMagrose IDA-Co Magnetic Agarose Beads Untuk Pemurnian Protein Tag-Nya

 

Nama Produk	Kucing. Tidak.	Spesifikasi
SweMagrose IDA-Co Magnetic Agarose Beads untuk Pemurnian Protein Tag-Nya	G3655-1ML	1 mL
	G3655-5ML	5 mL

 

 

Produk ini disediakan daripada manik magnet agarose yang diubah suai oleh IDA dan ion nikel kelat. Ia boleh dengan cekap dan cepat membersihkan protein bertanda histidin dalam sampel biologi tanpa penapisan emparan. Operasi ini mudah dan sesuai untuk penulenan protein tag histidin larut yang dinyatakan dalam supernatan atau sel bakteria, yis dan sel. Ia juga boleh digabungkan dengan peralatan penulenan protein berdaya tinggi untuk pemeriksaan dan pengasingan protein.

Co2+ mempunyai 4 ligan dan kurang penjerapan tidak spesifik, Ni2+ mempunyai 6 ligan dan keupayaan mengikat protein yang kuat, untuk lebih banyak protein sasaran, anda boleh memilih SweMagrose IDA-Ni Magnetic Agarose Beads kami yang lain untuk His -Pemurnian Protein Tag (G3654).

 

 

Kapal dengan ais basah; Simpan pada 4 darjah, sah selama 12 bulan.

 

 

Nombor Komponen	Komponen	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	SweMagrose IDA-Co Magnetic Agarose Beads untuk Pemurnian Protein Tag-Nya	1 mL	5 mL
Manual		1 peratus

 

 

1. Konfigurasi pelbagai reagen boleh dirujuk seperti berikut. Pengguna boleh memilih jumlah manik magnetik dan formula penimbal yang sesuai mengikut situasi reagen.

Komponen	Kelantangan
10% c3% 97PBS (200 mM Natrium Fosfat% 2c pH7.4)	50 mL
10x Penampan Imidazole(200 mM Natrium Fosfat, 5 M Imidazole, pH7.4)	50 mL
Penyingkiran kobalt(10 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH7.4)	10 mL
Larutan pencuci beralkali(0.5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 mL
href="javascript:;" Kobalt sulfat(100 mM CoSO4)	15 mL
Larutan pengawetan (20% etanol)	50 mL

 

2. Konfigurasi penimbal

Prestasi pengikatan protein sasaran dengan manik pengkelat ion logam secara langsung akan menjejaskan kecekapan penulenan protein sasaran, dan pelbagai penampan juga akan menjejaskan pemulihan dan ketulenan protein sasaran sedikit sebanyak. Oleh itu, sebelum penulenan protein berskala besar, pengguna harus mereka bentuk eksperimen mereka sendiri untuk menyaring penimbal yang sesuai untuk protein sasaran, termasuk penimbal pengikat, penimbal pencuci dan penimbal elusi. Sistem penimbal yang disediakan di bawah sesuai untuk penulenan kebanyakan protein tag histidin untuk rujukan pengguna.:

Penampan Pengikat:20 mM Natrium Fosfat,500 mM NaCl,5~50 mM Imidazole,pH7.4

Penimbal Basuh:20 mM Natrium Fosfat,500 mM NaCl,50~100 mM Imidazole,pH7.4

Penampan Elusi:20 mM Natrium Fosfat, 500 mM NaCl, 500 mM Imidazole, pH7.4

3. Sampel rawatan

a) E. coli, yis dan protein lain yang diekspresikan secara intraselular: tambahkan 5~10 mL Penampan Pengikat setiap gram sel, tambahkan perencat protease (cth, PMSF pada kepekatan akhir 1 mM), menggantung semula sel, dan melisiskan secara ultrasonik. sel dalam mandi ais, iaitu sampel protein kasar. Jika sampel terlalu likat, jumlah nuklease yang sesuai boleh ditambah kepada sampel mentah mengikut keperluan dan diletakkan di atas ais selama 30 minit untuk merendahkan asid nukleik. Sebagai alternatif, sentrifugasi sampel protein boleh dilakukan mengikut keperluan.

b) Protein terekspresi ekstraselular: Sampel protein kasar diperoleh apabila supernatan ekspresi ekstraselular dicairkan dengan jumlah Penampan Pengikat yang sama.

c) Protein yang diekspresikan secara intraselular dalam sel haiwan: Ambil jumlah sel haiwan yang sesuai, basuh dengan jumlah PBS yang sesuai (disediakan sendiri) sekali, buang supernatan, tangguh semula dengan jumlah Penampan Pengikat yang sesuai yang mengandungi 1% (v/v) Triton X -100 atau 1% (v/v) NP-40, tambahkan perencat protease (cth, PMSF pada kepekatan akhir 1 mM), dan letakkannya di atas ais selama 10 minit, iaitu sampel protein kasar.

4. Pengikatan protein sasaran pada manik magnet:

a) Gantungkan 2 g berat basah organisma dengan 10 mL Penampan Pengikat, dan selepas pemecahan dan lisis, sampel protein mentah sasaran ditambah ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet yang telah dirawat terlebih dahulu, dan tiub itu diletakkan dalam pengadun vorteks dan digoncang selama 15 s. Sampel protein mentah sasaran kemudiannya ditambah ke dalam tiub emparan dengan manik magnet yang telah dirawat terlebih dahulu.

b) Letakkan tiub emparan pada pengadun berputar selama 20-30 min pada suhu bilik (jika perlu, boleh berputar dan gaul selama 1 jam pada suhu rendah 2-8 darjah untuk mengelakkan degradasi protein sasaran) .

c) Letakkan tiub emparan pada pemisah magnetik untuk pengasingan, pindahkan supernatan ke tiub emparan baru untuk ujian seterusnya, dan keluarkan tiub emparan daripada pemisah magnetik untuk langkah-langkah pencucian seterusnya.

5. Cucian manik magnetik:

a) Tambah 10 mL Penimbal Basuh ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet, putar tiub beberapa kali perlahan-lahan untuk menggantung semula manik, asingkan secara magnetik, dan pindahkan larutan pencuci ke tiub emparan baharu untuk pensampelan. Ulangi prosedur ini sekali.

b) Tambah 10 mL Penimbal Basuh ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet untuk menggantung semula manik, pindahkan ampaian manik ke tiub emparan baharu (untuk mengelakkan pencemaran protein sasaran oleh protein yang tidak terserap secara khusus pada dinding tiub emparan asal. ), asingkan secara magnetik, dan pipetkan supernatan ke dalam Tiub Pengumpul Penimbal Basuh.

6. Elusi protein sasaran

a) Pengguna boleh melaraskan kepekatan protein sasaran dengan menukar isipadu elusi mengikut keperluan. Tambah 2-10 mL Penampan Elusi, pusingkan tiub beberapa kali perlahan-lahan untuk menggantung manik, asingkan manik secara magnetik dan kumpulkan eluat ke dalam tiub emparan baharu, iaitu sampel protein sasaran yang telah disucikan.

a) Jika perlu, ulangi langkah di atas sekali untuk mengumpul sampel ke dalam tiub emparan baharu untuk menguji sama ada protein sasaran dielusi sepenuhnya.

b) Kesan protein sasaran dengan SDS-PAGE atau Western blotting. Jika anda perlu mengukur kepekatan protein, anda boleh menggunakan Penampan Elusi untuk menyifarkan kepekatan, atau menggunakan dialisis atau ultrafiltrasi untuk mengeluarkan Imidazole dan kemudian mengukur kepekatan.

7. Pemprosesan pasca manik magnetik

a) Tambah 5 mL Penampan Elusi ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet, pusingkan tiub itu ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung manik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan.

b) Ulang langkah di atas dua kali.

c) Tambah 5 mL ddH O ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet, pusingkan tiub itu ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung manik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan.

d) Ulang langkah di atas dua kali.

e) Tambahkan larutan pengawetan pada manik magnet untuk menghasilkan jumlah isipadu 5 mL, simpan pada 2-30 darjah (untuk penyimpanan jangka panjang, letak pada 2-8 darjah ), dan boleh digunakan untuk pemurnian seterusnya protein yang sama.

8. Penjanaan semula manik magnetik

Apabila manik magnet digunakan secara berterusan selama 3 kali atau lebih, keupayaan untuk mengikat protein sasaran mungkin berkurangan dengan ketara, dan disyorkan untuk menjalankan proses penjanaan semula manik magnet. Ambil 5 mL penggantungan manik magnetik 10% (v/v) sebagai contoh untuk menggambarkan operasi penjanaan semula manik magnet secara terperinci.

a) Suspensi manik magnet diasingkan secara magnetik, keluarkan supernatan, dan keluarkan tiub emparan daripada pemisah magnet, tambah 5 mL ddH2O ke dalam tiub emparan dan pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik magnet. , diasingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan.

b) Tambah 5 mL penanggal kobalt, pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik magnet, putar dan gaul selama 5 minit pada suhu bilik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan. Ulangi langkah ini sekali.

c) Tambah 5 mL ddH2O ke dalam tiub emparan yang mengandungi manik magnet, pusingkan tiub itu ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung manik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan.

d) Rawatan alkali (langkah pilihan): tambah 5 mL penimbal pencuci beralkali, pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik, putar dan gaul selama 5 minit pada suhu bilik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan. Tambah 5 mL ddH2O, pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan. Ulang langkah pencucian ddH2O 3-5 kali sehingga larutan pencucian adalah neutral.

e) Tambah 5 mL nikel klorida, pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik, putar dan gaul selama 20 minit pada suhu bilik, asingkan secara magnetik dan keluarkan supernatan.

f) Tambah 5 mL ddH2O dan pusingkan tiub emparan ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk menggantung semula manik, memisahkan secara magnet dan mengeluarkan supernatan. Ulangi langkah ini sebanyak 4 kali.

g) Tambahkan larutan pengawetan pada manik magnet untuk menghasilkan jumlah isipadu 5 mL dan simpan pada 2-30 darjah (untuk penyimpanan jangka panjang, letakkan pada 2-8 darjah ).

 

 

1. Produk ini disimpan dalam 20% etanol dan perlu diganti sebelum digunakan.

2. Jangan bekukan atau keringkan manik, kerana ini boleh menjejaskan penggunaan akhir.

3. Gunakan dengan bingkai magnet yang sepadan.

 

Untuk kegunaan penyelidikan sahaja. Bukan untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik!

 

 

Cool tags: manik agarose magnet swemagrose ida-co untuk penulenan protein tag-nya, China swemagrose ida-co manik agarose magnetik untuk penulenan protein tag-nya pengeluar, pembekal, kilang